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メラミンは、特定の食品カテゴリーに偶発的または意図的に混入する可能性のある食品汚染物質として認識されています。本研究の目的は、乳児用調製粉乳および粉乳中のメラミンの検出および定量を検証することです。イラン各地の乳児用調製粉乳および粉乳を含む合計40種類の市販食品サンプルを分析しました。サンプルのおおよそのメラミン含有量は、高速液体クロマトグラフィー-紫外線（HPLC-UV）システムを使用して測定しました。0.1～1.2 μg mL-1の範囲でメラミンを検出するための検量線（R2 = 0.9925）を作成した。定量限界および検出限界は、それぞれ1 μg mL-1および3 μg mL-1でした。乳児用調製粉乳および粉乳中のメラミンを検査した結果、乳児用調製粉乳および粉乳サンプル中のメラミン濃度は、それぞれ0.001～0.095 mg kg-1および0.001～0.004 mg kg-1であることが示されました。これらの値はEU法および食品規格（コーデックス）に準拠しています。メラミン含有量が低減されたこれらの乳製品の摂取は、消費者の健康に重大なリスクをもたらさないことに留意することが重要です。これはリスク評価の結果によっても裏付けられています。
メラミンは、シアナミドから誘導される分子式C3H6N6の有機化合物です。水への溶解度は非常に低く、窒素含有量は約66%です。メラミンは広く使用されている工業用化合物であり、プラスチック、肥料、食品加工機器（食品包装材や台所用品を含む）の製造において、幅広い用途で合法的に使用されています1,2。また、メラミンは疾患治療のための薬物担体としても使用されています。メラミンに含まれる窒素含有量が高いため、この化合物の誤用や、食品成分にタンパク質分子の特性を付与する恐れがあります3,4。そのため、乳製品を含む食品にメラミンを添加すると、窒素含有量が増加します。そのため、牛乳のタンパク質含有量が実際よりも高いという誤った結論が導き出されました。
メラミンを1グラム添加するごとに、食品中のタンパク質含有量は0.4％増加します。しかし、メラミンは水に非常に溶けやすく、より深刻な害を引き起こす可能性があります。牛乳などの液体製品に1.3グラムのメラミンを添加すると、牛乳のタンパク質含有量が30％増加する可能性があります5,6。メラミンはタンパク質含有量を増やすために動物性食品だけでなく人間の食品にも添加されていますが7、コーデックス委員会（CAC）と各国当局はメラミンを食品添加物として承認しておらず、飲み込んだり、吸入したり、皮膚から吸収された場合に危険であるとリストしています。2012年には、世界保健機関（WHO）の国際がん研究機関が、メラミンが人体に有害である可能性があるため、クラス2Bの発がん性物質にリストしました8。メラミンに長期間さらされると、がんや腎臓障害を引き起こす可能性があります2。食品中のメラミンはシアヌル酸と複合して水に溶けない黄色の結晶を形成し、腎臓や膀胱の組織に損傷を与え、尿路がんや体重減少を引き起こす可能性があります9,10。メラミンは急性食中毒を引き起こし、高濃度の場合は特に乳児や幼児に死をもたらす可能性があります。11 世界保健機関 (WHO) も CAC ガイドラインに基づき、人間のメラミン耐容一日摂取量 (TDI) を 0.2 mg/kg 体重/日と設定しています。12 米国食品医薬品局 (US FDA) は、乳児用調製粉乳で 1 mg/kg、その他の食品で 2.5 mg/kg のメラミン最大残留基準を設定しています。2,7 2008 年 9 月、国内の乳児用調製粉乳製造業者数社が、製品のタンパク質含有量を増やすために粉ミルクにメラミンを添加していたことが報じられました。その結果、粉ミルク中毒が発生し、全国的なメラミン中毒事件が発生し、294,000 人以上の子供が
都市生活の困難さ、母親や子供の病気など、様々な要因により母乳育児が必ずしも可能とは限らず、そのため乳児用調合乳が乳児に用いられることがあります。そのため、母乳の成分にできるだけ近い乳児用調合乳を生産する工場が設立されました14。市販の乳児用調合乳は通常、牛乳を原料とし、脂肪、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラルなどの成分を特別に配合して作られています。母乳に近づけるため、調合乳のタンパク質と脂肪含有量は様々で、牛乳の種類によってはビタミンや鉄などのミネラルなどの成分が強化されています15。乳児は敏感なグループであり、中毒の危険性があるため、粉ミルクの摂取の安全性は健康にとって極めて重要です。中国の乳児のメラミン中毒事件以降、世界各国がこの問題に強い関心を寄せ、この問題に対する関心も高まっています。したがって、乳児の健康を守るためには、乳児用調製粉乳の生産管理を強化することが特に重要です。食品中のメラミンを検出する方法は、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）、電気泳動、官能検査、分光光度法、抗原抗体酵素免疫測定法など、様々な方法があります16。2007年、米国食品医薬品局（FDA）は、食品中のメラミンとシアヌル酸を定量するためのHPLC法を開発・公表しました。これはメラミン含有量を測定する最も効果的な方法です17。
新たな赤外分光法を用いて測定された乳児用調製粉乳中のメラミン濃度は、0.33～0.96ミリグラム/キログラム（mg kg-1）の範囲でした。18 スリランカで行われた研究では、全粉乳中のメラミン濃度は0.39～0.84 mg kg-1の範囲でした。さらに、輸入乳児用調製粉乳サンプルでは、​​それぞれ0.96 mg/kgと0.94 mg/kgという最も高い濃度のメラミンが検出されました。これらの濃度は規制値（1 mg/kg）を下回っていますが、消費者の安全のために監視プログラムが必要です。19
イラン産乳児用調合乳中のメラミン含有量を調査する研究が複数行われています。サンプルの約65%にメラミンが含まれており、平均0.73 mg/kg、最大3.63 mg/kgでした。別の研究では、乳児用調合乳中のメラミン含有量は0.35～3.40 μg/kgの範囲で、平均1.38 μg/kgと報告されています。イラン産乳児用調合乳中のメラミンの存在と含有量は様々な研究で評価されており、一部のサンプルでは規制当局が定めた上限値（1食あたり2.5 mg/kg）を超えるメラミンが含まれていました。
食品業界における粉ミルクの直接的および間接的な消費量の大きさ、そして乳児用調合乳が子供の栄養摂取において特に重要であることを考慮し、本研究は粉ミルクおよび乳児用調合乳中のメラミン検出法の検証を目的とした。実際、本研究の第一の目的は、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）と紫外線（UV）検出器を用いて、乳児用調合乳および粉ミルク中のメラミン混入を迅速かつ簡便かつ正確に定量的に検出する方法を開発することであった。第二の目的は、イラン市場で販売されている乳児用調合乳および粉ミルク中のメラミン含有量を測定することであった。
メラミン分析に使用される機器は、食品の生産場所によって異なります。牛乳と乳児用調製粉乳中のメラミン残留物を測定するために、高感度で信頼性の高いHPLC-UV分析法を使用しました。乳製品には、メラミン測定に干渉する可能性のあるさまざまなタンパク質と脂肪が含まれています。したがって、Sunら22が指摘しているように、機器分析の前に適切かつ効果的なクリーンアップ戦略が必要です。この研究では、使い捨てシリンジフィルターを使用しました。この研究では、C18カラムを使用して、乳児用調製粉乳と粉ミルク中のメラミンを分離しました。図1は、メラミン検出のクロマトグラムを示しています。また、0.1～1.2 mg / kgのメラミンを含むサンプルの回収率は95％～109％の範囲で、回帰式はy = 1.2487x − 0.005（r = 0.9925）で、相対標準偏差（RSD）値は0.8～2％の範囲でした。得られたデータは、本法が研究対象濃度範囲において信頼性が高いことを示しています（表1）。メラミンの機器検出限界（LOD）および定量限界（LOQ）はそれぞれ1μg mL-1および3μg mL-1でした。さらに、メラミンのUVスペクトルは242 nmに吸収帯を示しました。本検出法は感度、信頼性、精度に優れており、メラミン濃度の日常的な測定に使用できます。
同様の結果が複数の著者によって発表されています。 乳製品中のメラミン分析のための高性能液体クロマトグラフィー-フォトダイオードアレイ（HPLC）法が開発されました。定量下限は、240 nmで粉ミルクの場合は340 μg kg−1、乳児用調製粉乳の場合は280 μg kg−1でした。 Filazzi et al. (2012) は、HPLCでは乳児用調製粉乳でメラミンは検出されなかったと報告しました。 しかし、粉ミルクサンプルの8%に0.505～0.86 mg/kgのレベルのメラミンが含まれていました。 Tittlemiet et al.23 は同様の研究を行い、高速液体クロマトグラフィー-質量分析/MS（HPLC-MS/MS）により、乳児用調製粉乳（サンプル番号：72）のメラミン含有量をおよそ0.0431～0.346 mg kg−1と測定しました。 (2010)では、グリーンケミストリーアプローチ（アセトニトリル不使用）と逆相高速液体クロマトグラフィー（RP-HPLC）を用いて、乳児用調製粉乳と牛乳中のメラミンを推定した。サンプル濃度範囲は1.0～80 g/mLで、応答は直線的であった（r > 0.999）。この方法では、5～40 g/mLの濃度範囲で回収率は97.2～101.2であり、再現性は相対標準偏差1.0%未満であった。さらに、観察されたLODとLOQはそれぞれ0.1 g mL-1と0.2 g mL-124であった。Lutterら（2011）は、HPLC-UVを用いて牛乳と牛乳ベースの乳児用調製粉乳中のメラミン汚染を測定した。メラミン濃度は< 0.2～2.52 mg kg-1であった。 HPLC-UV法の線形ダイナミックレンジは、牛乳では0.05～2.5 mg kg−1、タンパク質質量分率<15%の乳児用調製粉乳では0.13～6.25 mg kg−1、タンパク質質量分率15%の乳児用調製粉乳では0.25～12.5 mg kg−1であった。LOD（およびLOQ）結果は、牛乳で0.03 mg kg−1（0.09 mg kg−1）、タンパク質<15%の乳児用調製粉乳では0.06 mg kg−1（0.18 mg kg−1）、タンパク質15%の乳児用調製粉乳では0.12 mg kg−1（0.36 mg kg−1）であり、LODとLOQの信号対雑音比はそれぞれ3と1025であった。Diebesら（2012）は、HPLC/DMDを用いて乳児用調製粉乳と粉ミルクサンプル中のメラミン濃度を調査した。乳児用調製粉乳中の最低濃度および最高濃度はそれぞれ9.49 mg kg-1および258 mg kg-1であった。検出限界（LOD）は0.05 mg kg-1であった。
Javaid らは、乳児用調製粉乳中のメラミン残留物がフーリエ変換赤外分光法 (FT-MIR) により 0.002～2 mg kg−1 の範囲であると報告しました (LOD = 1 mg kg−1、LOQ = 3.5 mg kg−1)。Rezai ら27 は、メラミンを評価するために HPLC-DDA (λ = 220 nm) 法を提案し、粉ミルクに対して 0.08 μg mL−1 の LOQ を達成しましたが、これは本研究で得られたレベルよりも低いものでした。Sun らは、固相抽出 (SPE) による液体ミルク中のメラミン検出のための RP-HPLC-DAD を開発した。彼らは LOD 18 と LOQ 60 μg kg−128 を得ており、これは本研究よりも感度が高いタンパク質サプリメント中のメラミン含有量を評価するためのHPLC-DMD法の有効性が確認されたが、定量限界は0.05～3mg/kgであったが、この研究で使用された方法よりも感度は低かった29。
分析ラボは、様々なサンプル中の汚染物質をモニタリングすることで、環境保護において重要な役割を果たしていることは間違いありません。しかし、分析中に多数の試薬や溶媒を使用すると、有害な残留物が形成される可能性があります。そのため、分析手順による作業者や環境への悪影響を軽減または排除するために、2000年にグリーン分析化学（GAC）が開発されました26。メラミンの同定には、クロマトグラフィー、電気泳動、キャピラリー電気泳動、酵素結合免疫吸着測定（ELISA）などの従来のメラミン検出法が使用されてきました。しかし、数多くの検出法の中でも、優れた感度、選択性、迅速な分析時間、そしてユーザーフレンドリーな特性から、電気化学センサーが大きな注目を集めています30,31。グリーンナノテクノロジーは、生物学的経路を利用してナノ材料を合成することで、有害廃棄物の発生とエネルギー消費を削減し、持続可能な慣行の実施を促進します。例えば、環境に優しい材料から作られたナノ複合材料は、メラミンなどの物質を検出するためのバイオセンサーに使用できます32,33,34。
本研究では、固相マイクロ抽出（SPME）が従来の抽出法と比較してエネルギー効率と持続可能性に優れているため、効果的に使用されていることを示しています。SPMEの環境への配慮とエネルギー効率は、分析化学における従来の抽出法の優れた代替手段となり、より持続可能で効率的なサンプル調製法を提供します35。
2013年、Wuらは、メラミンと抗メラミン抗体の結合を利用し、免疫測定法を用いて乳児用調合乳中のメラミンを迅速に検出する、高感度かつ選択的な表面プラズモン共鳴（mini-SPR）バイオセンサーを開発しました。メラミン結合ウシ血清アルブミンを用いた免疫測定法と組み合わせたこのSPRバイオセンサーは、使いやすく低コストな技術であり、検出限界はわずか0.02μg/mLです。
NasiriとAbbasianは、高電位ポータブルセンサーと酸化グラフェン-キトサン複合体（GOCS）を組み合わせて、市販サンプル中のメラミンを検出しました37。この方法は、非常に高い選択性、精度、応答を示しました。GOCSセンサーは、優れた感度（239.1 μM−1）、0.01～200 μMの直線範囲、親和定数1.73 × 104、最大10 nMの検出限界（LOD）を示しました。さらに、2024年にChandrasekharらが実施した研究では、環境に優しく費用対効果の高いアプローチが採用されました。彼らは、パパイヤの皮の抽出物を還元剤として使用し、環境に優しい方法で酸化亜鉛ナノ粒子（ZnO-NP）を合成しました。その後、乳児用調製粉乳中のメラミンを測定するための独自の顕微ラマン分光法が開発されました。農業廃棄物から得られる ZnO-NP は、メラミンの監視と検出のための貴重な診断ツールおよび信頼性の高い低コストの技術としての可能性を実証しています38。
Alizadeh ら (2024) は、高感度金属有機構造体 (MOF) 蛍光プラットフォームを用いて粉ミルク中のメラミンを測定した。3σ/S を用いて測定したセンサーの直線範囲および検出下限は、それぞれ 40～396.45 nM (25 μg kg-1～0.25 mg kg-1 に相当)、40 nM (25 μg kg-1 に相当) であった。この範囲は、乳児用調製粉乳 (1 mg kg-1) およびその他の食品/飼料サンプル (2.5 mg kg-1) 中のメラミンの同定に設定された最大残留基準値 (MRL) をはるかに下回っている。蛍光センサー (テルビウム (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) は、粉ミルク中のメラミンの検出において HPLC39 よりも高い精度と精密な測定能力を示した。グリーンケミストリーにおけるバイオセンサーとナノ複合材料は、検出能力を高めるだけでなく、持続可能な開発の原則に沿って環境への危険性を最小限に抑えます。
グリーンケミストリーの原理は、メラミンの測定のための様々な方法に適用されてきました。 1つのアプローチは、クエン酸で架橋した天然極性ポリマーβ-シクロデキストリンを用いたグリーン分散固相マイクロ抽出法の開発であり、乳児用調製粉乳や温水などのサンプルからメラミンを効率的に抽出します40。 もう1つの方法は、マンニッヒ反応を用いて牛乳サンプル中のメラミンを測定します。 この方法は、安価で環境に優しく、直線範囲が0.1～2.5 ppmで検出限界が低いため、非常に正確です41。 さらに、フーリエ変換赤外透過分光法を用いて、液体牛乳と乳児用調製粉乳中のメラミンを定量的に測定する費用対効果が高く環境に優しい方法が開発され、高精度で検出限界がそれぞれ1 ppmと3.5 ppmです42。 これらの方法は、グリーンケミストリーの原理をメラミンの測定のための効率的で持続可能な方法の開発に応用していることを示しています。
いくつかの研究では、メラミン検出のための革新的な方法が提案されています。例えば、固相抽出法と高速液体クロマトグラフィー（HPLC）43 や、複雑な前処理やイオン対試薬を必要とせず、化学廃棄物の量を削減できる高速高速液体クロマトグラフィー（HPLC）44 などが挙げられます。これらの方法は、乳製品中のメラミンの測定において正確な結果をもたらすだけでなく、グリーンケミストリーの原則にも準拠しており、有害化学物質の使用を最小限に抑え、分析プロセス全体の環境への影響を軽減します。
異なるブランドの40サンプルを3回繰り返して検査し、その結果を表2に示します。乳児用調製粉乳および粉ミルクサンプル中のメラミン濃度は、それぞれ0.001～0.004 mg/kg、0.001～0.095 mg/kgの範囲でした。乳児用調製粉乳については、3つの年齢群間で有意な変化は認められませんでした。また、粉ミルクでは80%でメラミンが検出されましたが、乳児用調製粉乳では65%がメラミンに汚染されていました。
市販の粉ミルクのメラミン含有量は乳児用調製粉乳よりも高く、その差は有意であった（p<0.05）（図2）。
得られた結果は、FDA（米国食品医薬品局）が定めた基準値（1 mg/kgおよび2.5 mg/kg未満）を下回っていました。さらに、この結果はCAC（2010）およびEU45,46が定めた基準値と一致しており、乳児用調製粉乳の最大許容値は1 mg/kg、乳製品の最大許容値は2.5 mg/kgです。
Ghanatiらによる2023年の研究47によると、イランで包装された様々な種類の牛乳のメラミン含有量は、50.7～790 μg kg−1の範囲でした。彼らの結果は、FDAの許容限度を下回っていました。私たちの結果は、Shoderら48とRimaら49の結果よりも低いです。Shoderら（2010）は、ELISAで測定した粉乳（n=49）のメラミン濃度が0.5～5.5 mg/kgの範囲であることを発見しました。Rimaらは、粉乳中のメラミン残留物を蛍光分光光度法で分析し、粉乳のメラミン含有量が0.72～5.76 mg/kgであることを発見しました。2011年にはカナダで、液体クロマトグラフィー（LC/MS）を用いて乳児用調製粉乳（n=94）のメラミン濃度をモニタリングする研究が行われました。メラミン濃度は許容限度値（暫定基準値：0.5 mg kg-1）を下回っていました。検出されたメラミン濃度の不正が、タンパク質含有量を増やすための策略であった可能性は低いですが、肥料の使用、容器内容物の移動、あるいは類似の要因では説明できません。さらに、カナダに輸入された粉乳中のメラミンの供給源は明らかにされていませんでした50。
Hassani らは、2013 年にイラン市場で粉乳と液体ミルクのメラミン含有量を測定し、同様の結果を得ました。その結果、1 つのブランドの粉乳と液体ミルクを除き、他のすべてのサンプルがメラミンに汚染されており、その濃度は粉乳で 1.50 ～ 30.32 μg g−1、ミルクで 0.11 ～ 1.48 μg ml−1 でした。注目すべきことに、いずれのサンプルでもシアヌル酸は検出されず、消費者がメラミン中毒になる可能性は低いと考えられます。51 これまでの研究では、粉乳を含むチョコレート製品のメラミン濃度を評価しています。輸入サンプルの約 94% とイランサンプルの 77% にメラミンが含まれていました。輸入サンプルのメラミン濃度は 0.032 ～ 2.692 mg/kg全体として、サンプルの 85% でメラミンが検出されましたが、許容限度を超えるレベルがあったのは特定のブランド 1 つだけでした。44 Tittlemier らは、粉ミルク中のメラミン レベルが 0.00528 ～ 0.0122 mg/kg の範囲であると報告しました。
表3は、3つの年齢層におけるリスク評価結果をまとめたものです。すべての年齢層においてリスクは1未満でした。したがって、乳児用調製粉乳中のメラミンによる非発がん性の健康リスクはありません。
乳製品におけるメラミンの汚染レベルが低い場合は、調理中の意図しない混入による可能性があり、高い場合は意図的な添加による可能性があります。さらに、メラミン含有量が低い乳製品を摂取することによる人体への全体的な健康リスクは低いと考えられます。したがって、このような低レベルのメラミンを含む製品を摂取しても、消費者の健康にリスクはないと結論付けることができます52。
乳製品業界における食品安全管理の重要性、特に公衆衛生の保護の観点から、粉ミルクおよび乳児用調製粉乳中のメラミン濃度と残留物を評価・比較する方法の開発と検証は極めて重要です。乳児用調製粉乳および粉ミルク中のメラミンを測定するための、簡便で正確なHPLC-UV分光光度計が開発されました。この方法は、信頼性と精度を確保するために検証されました。この方法の検出限界および定量限界は、乳児用調製粉乳および粉ミルク中のメラミン濃度を測定するのに十分な感度であることが示されました。当社のデータによると、イラン産サンプルのほとんどでメラミンが検出されました。検出されたメラミン濃度はすべてCACが設定した最大許容値を下回っており、これらの乳製品の摂取が人の健康にリスクをもたらさないことを示しています。
使用した化学試薬はすべて分析グレードのものでした。メラミン（2,4,6-トリアミノ-1,3,5-トリアジン）純度99%（Sigma-Aldrich、ミズーリ州セントルイス）、HPLCグレードのアセトニトリル（Merck、ドイツ、ダルムシュタット）、超純水（Millipore、フランス、モルフハイム）。使い捨てシリンジフィルター（Chromafil Xtra PVDF-45/25、孔径0.45 μm、膜径25 mm）（Macherey-Nagel、ドイツ、デューレン）。
サンプルの準備には、超音波浴槽 (Elma、ドイツ)、遠心分離機 (Beckman Coulter、クレーフェルト、ドイツ)、および HPLC (KNAUER、ドイツ) が使用されました。
UV検出器を備えた高速液体クロマトグラフ（KNAUER、ドイツ）を使用した。HPLC分析条件は以下のとおりである：ODS-3 C18分析カラム（4.6 mm×250 mm、粒子サイズ5μm）（MZ、ドイツ）を備えたUHPLC Ultimateシステムを使用した。HPLC溶離液（移動相）はTFA/メタノール混合液（450:50 mL）、流量1 mL/分であった。検出波長は242 nmであった。注入量は100 μL、カラム温度は20 °Cであった。薬物の保持時間は長い（15分）ため、次の注入は25分後に行う必要がある。メラミンは、保持時間とメラミン標準のUVスペクトルピークを比較することにより同定された。
メラミン標準溶液（10μg/mL）を水で調製し、遮光して冷蔵庫（4℃）に保存した。原液を移動相で希釈し、標準溶液を調製した。各標準溶液をHPLCに7回注入した。得られたピーク面積と濃度の回帰分析により、検量線10を算出した。
市販の牛乳粉乳（20 サンプル）および異なるブランドの牛乳ベースの乳児用調製粉乳（20 サンプル）を、イランの地元のスーパーマーケットおよび薬局から、異なる年齢グループの乳児（0～6 か月、6～12 か月、および 12 か月超）に与えるために購入し、分析まで冷蔵温度（4 °C）で保管しました。次に、均質化した粉乳 1 ± 0.01 g を量り取り、アセトニトリル:水（50:50、v/v、5 mL）と混合しました。混合物を 1 分間撹拌し、次に超音波浴槽で 30 分間超音波処理し、最後に 1 分間振盪しました。次に、混合物を室温で 9000 × g で 10 分間遠心分離し、上清を 0.45 μm シリンジフィルターを使用して 2 ml オートサンプラーバイアルに濾過しました。濾液（250μl）を水（750μl）と混合し、HPLCシステムに注入した10,42。
この方法を検証するため、最適条件下での回収率、正確性、検出限界（LOD）、定量限界（LOQ）、および精度を測定した。LODは、ピーク高さがベースラインノイズレベルの3倍となるサンプル含有量と定義した。一方、ピーク高さが信号対雑音比（S/N比）の10倍となるサンプル含有量をLOQと定義した。
デバイスの応答は、7 つのデータ ポイントからなる検量線を使用して決定しました。異なるメラミン含有量 (0、0.2、0.3、0.5、0.8、1、1.2) を使用しました。メラミン計算手順の直線性を決定しました。さらに、いくつかの異なるレベルのメラミンをブランク サンプルに追加しました。検量線は、0.1～1.2 μg mL-1 の標準メラミン溶液を乳児用調製粉乳および粉ミルク サンプルに連続注入することによって作成され、その R2 = 0.9925 でした。精度は手順の繰り返し精度と再現精度によって評価され、1 日目とその後 3 日目 (3 回繰り返し) にサンプルを注入することによって達成されました。方法の繰り返し精度は、添加したメラミンの 3 つの異なる濃度の RSD % を計算することによって評価しました。精度を決定するために回収率調査を実施しました。抽出法による回収度は、乳児用調製粉乳と粉ミルクのサンプル中のメラミン濃度の3つのレベル（0.1、1.2、2）で計算されました9,11,15。
推定一日摂取量（EDI）は次の式を使用して決定されました：EDI = Ci × Cc/BW。
ここで、Ci は平均メラミン含有量、Cc は牛乳の消費量、BW は子供の平均体重です。
データ解析はSPSS 24を用いて実施した。正規性検定はコルモゴロフ・スミルノフ検定を用いて行った。すべてのデータはノンパラメトリック検定（p = 0）で行った。したがって、群間の有意差を判定するために、クラスカル・ワリス検定とマン・ホイットニー検定を用いた。
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